荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A方法研究
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- 2021-04-28
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目的:建立快速、灵敏、特异地检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的荧光定量PCR检测方法。方法:以SEA基因作为肠毒素A的检测靶序列,设计荧光定量PCR引物和Taqman探针,优化反应体系的主要成分浓度和循环条件,评价方法的灵敏度、特异性和重复性,并对22株食物中毒中分离的金黄色葡萄球菌进行肠毒素A的检测。结果:建立金黄色葡萄球菌肠毒素A的荧光定量PCR检测方法。25μl荧光定量PCR反应体系主要成分浓度分别为Mg2+7.0 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,引物0.4μmol/L,探针0.7μmol/L,TaqDNA聚合酶2.5U。方法可检出最低45个拷贝的细菌DNA,特异性和重复性良好。从22株食物中毒中分离的金黄色葡萄球菌中检出肠毒素A阳性菌株6株。结论:荧光定量PCR可快速、准确的检出金黄色葡萄球菌的肠毒素A,能为金黄色葡萄球菌食物中毒诊断提供依据。
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